Aussi appelée analyse RFLP, la technique tire parti des polymorphismes dans les codes génétiques des individus. Même si tous les membres d'une espèce ont essentiellement la même composition génétique, ces légères différences expliquent les variations du phénotype, telles que l'apparence ou le métabolisme, entre les individus.
RFLP: Technique d'analyse et applications
La technique d'analyse RFLP consiste à couper une région particulière d' ADN avec une variabilité connue, avec des enzymes de restriction, puis à séparer les fragments d'ADN par électrophorèse sur gel d'agarose et à déterminer le nombre de fragments et les tailles relatives.
Une enzyme de restriction est une enzyme, une molécule protéique, qui coupe l'ADN au niveau des sites de restriction. En substance, l'échantillon d'ADN est brisé et digéré par les enzymes de restriction. Les fragments résultants sont séparés en fonction de leurs longueurs et le motif des tailles de fragments sera différent pour chaque individu testé.
Le processus complet de RFLP nécessite le marquage de la sonde, la fragmentation de l'ADN, l'électrophorèse, le transfert, l'hybridation, le lavage et l'autoradiographie. Le RFLP détecté est visualisé en utilisant un film radiographique dans une autoradiographie, où les fragments d'ADN peuvent être visualisés et analysés après avoir été séparés les uns des autres par électrophorèse.
Certaines des applications pour l'analyse RFLP comprennent:
- Empreintes génétiques . Les médecins légistes peuvent utiliser l'analyse RFLP pour identifier les suspects sur la base d'échantillons de preuves recueillis lors de scènes de crimes.
- Paternité. Le RFLP est également utilisé pour déterminer la paternité ou pour retracer l'ascendance.
- Diversité génétique. La technique peut être utilisée dans l'étude de l'évolution et de la migration de la faune, en étudiant les modes de reproduction dans les populations animales et dans la détection et le diagnostic de certaines maladies.
La technique d'utilisation de la détection RFLP de la variation des génomes est un outil essentiel dans la cartographie du génome et l'analyse des maladies génétiques. Si l'on recherche l'emplacement d'un gène de maladie particulier dans un certain chromosome, les chercheurs analyseront alors l'ADN des membres d'une famille atteinte de la maladie, puis rechercheront des profils similaires d'hérédité dans les allèles RFLP.
Une fois qu'un gène de la maladie est localisé, la réalisation d'une analyse RFLP sur d'autres membres de la famille pourrait révéler un transporteur des gènes mutants ou signaler un risque global de maladie. Il est important de noter que la technique RFLP n'est pas largement utilisée maintenant que des techniques plus récentes et plus robustes sont utilisées pour l'analyse de l'ADN en médecine légale et dans plusieurs autres domaines.
Aspect négatif de l'analyse
Malheureusement, la technique d'analyse RFLP est fastidieuse et lente. En plus d'exiger une grande quantité d'ADN d'échantillon - l'échantillon devrait généralement être d'environ la taille d'un quart, ce qui est relativement important pour les échantillons d'ADN - le processus, de l'étiquetage de sonde au lavage et autoradiographie, peut prendre jusqu'à mois complet à compléter.
Les résultats du projet sur le génome humain ont pratiquement remplacé le besoin de RFLP. Le projet a permis de déterminer la séquence entière de l'ADN trouvé dans les cellules humaines, le génome humain, et d'identifier tous les gènes dans le génome humain.