Comment faire une solution saline tamponnée au phosphate

Comment faire ce tampon de coloration immunohistochimique

Par Nephron (Travail personnel) [CC-BY-SA-3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0) ou GFDL (http://www.gnu.org/copyleft/fdl.html) ], via Wikimedia Commons

La solution saline tamponnée au phosphate (PBS) est une solution tampon couramment utilisée pour la coloration immunohistochimique (IHC) et elle est souvent utilisée en recherche biologique. Le PBS est une solution saline à base d'eau contenant du phosphate acide de sodium, du chlorure de sodium et, dans certains cas, du chlorure de potassium et du dihydrogénophosphate de potassium.

Coloration immunohistochimique

L'immunohistochimie fait référence au procédé de détection d'antigènes tels que des protéines dans les cellules d'une coupe tissulaire en utilisant le principe des anticorps se liant spécifiquement aux antigènes dans les tissus biologiques.

La coloration immunofluorescente était la première méthode de coloration immunohistochimique.

Les antigènes deviennent visibles lorsqu'ils sont conjugués avec des anticorps en utilisant des colorants fluorescents en raison d'une réaction de liaison antigène-anticorps. Ce processus se produit lorsqu'il est activé en excitant la lumière d'une longueur d'onde spécifique sous un microscope à fluorescence.

L'osmolarité et les concentrations ioniques des solutions correspondent à celles du corps humain - elles sont isotoniques.

Une recette pour PBS

Vous pouvez préparer PBS de plusieurs façons. Il y a plusieurs formules. Certains d'entre eux ne contiennent pas de potassium, tandis que d'autres contiennent du calcium ou du magnésium .

Cette recette est relativement facile. C'est pour la solution mère de PBS 10X (0.1M). Cependant, vous pouvez également faire une solution de stock 1X, ou commencer avec cette recette de 10X et la diluer à 1X.

L'ensemble du processus prend environ 10 minutes.

Une option pour ajouter Tween est également fournie.

Ce dont vous aurez besoin pour faire du tampon PBS

Comment faire une solution saline tamponnée au phosphate (PBS)

Peser 10,9 g de phosphate de sodium anhydre dibasique (Na2HP04), 3,2 g de phosphate de sodium anhydre monobasique (NaH2P04) et 90 g de chlorure de sodium (NaCl).

Dissoudre dans un peu moins de 1 litre d'eau distillée.

Ajuster le pH à 7,4 et faire la solution jusqu'à un volume final de 1L.

Diluer 10X avant utilisation et réajuster le pH si nécessaire.

Vous pouvez préparer une solution de PBS contenant 0,5% de Tween 20 en ajoutant 5 ml de Tween 20 à la solution 1L.

Conseils pour faire du tampon PBS

Conservez le tampon à température ambiante après avoir préparé la solution de PBS.

Les réactifs non-anhydres peuvent être substitués mais vous devrez recalculer la masse appropriée de chacun pour accommoder les molécules d'eau ajoutées.

Utilisations de la solution saline tamponnée au phosphate (PBS)

La solution saline tamponnée au phosphate a de nombreuses utilisations car elle est isotonique et non toxique pour la plupart des cellules. Il peut être utilisé pour diluer des substances et il est souvent utilisé pour rincer les contenants de cellules. Le PBS peut être utilisé comme diluant dans diverses méthodes pour sécher les biomolécules parce que les molécules d'eau à l'intérieur de celui-ci seront structurées autour de la substance-protéine, par exemple. Il sera "séché" et immobilisé sur une surface solide.

Le pH reste stable et constant pour empêcher la destruction des cellules.

Le film mince d'eau qui se lie à la substance empêche la dénaturation ou d'autres changements conformationnels. Les tampons de carbonate peuvent être utilisés dans le même but mais avec moins d'efficacité.

Le PBS peut également être utilisé pour prendre un spectre de référence lors de la mesure de l'adsorption de protéines en ellipsométrie.