Ce tampon est utilisé pour étudier le mouvement de l'ADN
Ce tampon a une faible force ionique et une faible capacité tampon. Il convient mieux à l'électrophorèse de grands fragments d'ADN (> 20 kb) et devra être remplacé fréquemment ou recirculé pendant des durées de gel plus longues (> 4 h).
Dans cet esprit, vous pouvez envisager plusieurs lots du tampon.
Étant donné que le tampon est facile à fabriquer et que les étapes peuvent être effectuées rapidement, il ne devrait pas être particulièrement long ou difficile de réaliser plus d'un lot à la fois. En utilisant les instructions ci-dessous, cela ne devrait prendre que 30 minutes pour fabriquer le tampon TAE. Voici comment:
Préparer une solution mère d'EDTA
Une solution d'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique) est préparée à l'avance. L'EDTA ne va pas complètement dans une solution jusqu'à ce que le pH soit ajusté à environ 8,0. Pour une solution mère de 500 ml d'EDTA 0,5 M, peser 93,05 grammes de sel disodique EDTA (FW = 372,2). Dissoudre dans 400 millilitres d'eau déionisée et ajuster le pH avec de l'hydroxyde de sodium (NaOH). Compléter la solution à un volume final de 500 millilitres.
Fouetter une solution de stock de TAE
Faire une solution concentrée (50x) de TAE en pesant 242 grammes de base Tris (FW = 121,14) et en le dissolvant dans environ 750 millilitres d'eau déminéralisée.
Ajouter délicatement 57,1 millilitres d'acide glacial et 100 millilitres d'EDTA 0,5 M (pH 8,0). Après cela, ajuster la solution à un volume final de 1 litre. Cette solution mère peut être stockée à température ambiante. Le pH de ce tampon n'est pas ajusté et devrait être d'environ 8,5.
Préparer une solution de travail de TAE
La solution de travail de 1x tampon TAE est faite en diluant simplement la solution mère de 50x dans de l'eau déminéralisée.
Les concentrations finales de soluté sont de 40 mM. Tris-acétate et EDTA 1 mM. Le tampon est maintenant prêt pour l'utilisation d'un gel d'agarose.
Ce dont vous avez besoin pour le tampon
Puisque le tampon TAE ne nécessite qu'un ensemble d'instructions rapide et simple, le nombre de matériaux nécessaires n'est pas excessif. Vous aurez juste besoin de sel disodique EDTA, de base Tris et d'acide acétique glacial.
La fabrication du tampon nécessite également un pH-mètre et des étalons, selon le cas. Vous aurez également besoin de béchers ou de flacons de 600 millilitres et de 1500 millilitres ainsi que de cylindres gradués. Enfin, vous aurez besoin d'eau désionisée, de barres d'agitation et de plaques d'agitation.
Emballer
Où prévoyez-vous faire le tampon - sur un site d'école, un site de travail, ou un autre endroit, comme votre maison? Vérifiez l'inventaire avant de commencer à vous assurer que vous avez tous les documents ci-dessus pour le tampon TAE.
Si vous préférez ne pas avoir à payer pour du matériel, optez pour le tampon à l'extérieur de votre maison. Vous pouvez facilement commander le matériel dont vous avez besoin en ligne ou vous rendre dans un magasin spécialisé.