Comment lyophiliser une culture bactérienne (lyophilisation)

La lyophilisation, ou lyophilisation, est une procédure de laboratoire courte

La lyophilisation, également appelée lyophilisation ou cryodésiccation, consiste à retirer l'eau d'un produit après qu'il a été congelé (puis placé sous vide), permettant à la glace de passer d'un solide à une vapeur, sans passer par une phase liquide. La glace (ou d'autres solvants congelés) est éliminée d'un produit par le processus de sublimation et les molécules d'eau liées sont éliminées par le processus de désorption.

Les bases de la lyophilisation

L'une des meilleures façons de stocker une culture de bactéries, de champignons, de levures ou d'autres microorganismes pendant de longues périodes est d'utiliser le procédé de lyophilisation. Cette courte procédure de laboratoire peut être réalisée avec n'importe quel lyophilisateur disponible dans le commerce qui préservera votre collection de culture. Parce que la lyophilisation est la forme de séchage la plus complexe et la plus coûteuse, le procédé est généralement limité à des matériaux délicats et thermosensibles de grande valeur. Les substances qui ne sont pas endommagées par le gel peuvent généralement être lyophilisées, de sorte que le stockage réfrigéré est inutile.

Ce processus peut prendre aussi peu que trois heures, et aussi longtemps que 24 heures, sans compter le temps de croissance de la culture.

Le processus de lyophilisation étape par étape

  1. Tout d'abord, cultiver une culture de nuit, ou pelouse, du micro-organisme sur LB ou une autre gélose nutritive appropriée.

  2. Ensuite, préparez des flacons à bouchon à sertir stériles en autoclave à l'avance, avec les bouchons (bouchons en caoutchouc) placés de manière lâche sur le dessus. Placez des étiquettes en papier imprimées avec l'identification de la culture dans les tubes avant l'autoclavage. Sinon, utilisez des tubes avec des bouchons conçus pour la stérilité .

  1. Ajouter 4 ml de tampon de lyophilisation à la plaque. Si nécessaire, les cellules peuvent être suspendues à l'aide d'une tige de verre stérile.

  2. Transférer rapidement la suspension de culture dans les flacons stérilisés. Ajouter environ 1,5 ml par flacon. Sceller avec le capuchon en caoutchouc.

  3. Congeler la suspension de culture à l'intérieur des flacons en plaçant les flacons dans un congélateur -20 degrés Celcius.

  1. Une fois que les cultures sont congelées, préparez le lyophilisateur en le tournant et en laissant suffisamment de temps pour que les conditions de température et de vide appropriées se stabilisent. Pour ce faire, suivez les instructions du fabricant pour la marque particulière de lyophilisateur que vous utilisez.

  2. Soigneusement et aseptiquement, placez les bouchons de flacons sans serrer sur le dessus des flacons, de sorte que l'humidité puisse s'échapper pendant le processus de lyophilisation, et placer les flacons dans une chambre de lyophilisateur. Appliquer le vide à la chambre selon les instructions du fabricant.

  3. Laisser le temps de culture complètement lyophiliser (sécher). Cela peut prendre de quelques heures à une nuit en fonction du volume de chaque échantillon et combien d'échantillons vous avez.

  4. Retirer les échantillons de la chambre de lyophilisation selon les instructions du fabricant et sceller immédiatement les flacons avec les bouchons en caoutchouc, puis les sommets à sertir.

  5. Stocker la collection de culture lyophilisée à température ambiante.

Produits dont vous aurez besoin

Référence:

SP Scientifique. Principes de base de la lyophilisation. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/